NL
EN
FR
ES
PTPT
Nagalase (n-acetylgactosaminidase) is een enzym dat het Gc-eiwit deglycosyleert, ook bekend als vitamine D-bindend eiwit (VDBP). Het Gc-eiwit wordt daardoor niet meer in staat tot omzetting in actief GcMAF gemaakt. Als gevolg hiervan wordt de regulatie van macrofaagactivering voorkomen.
De activiteit van α-N-acetylgalactosaminidase (Nagalase) in serum of plasma wordt bepaald via een gepatenteerde methode die bestaat uit een tweestaps immunocapture-test.
Het is bekend dat Nagalase Gc-MAF en zijn natuurlijke voorloper Gc-globuline inactiveert. Er wordt voorgesteld dat patiënten behandeld zouden kunnen worden met substitutietherapie met Gc-MAF en Nagalase is geprojecteerd als marker (indicator) voor de effectiviteit van de Gc-MAF-therapie.
We willen u laten weten dat we een nieuwe, verbeterde methode hebben geïmplementeerd voor het meten van Nagalase-patiënten, gerapporteerd als NAGAnew. Het beschikt over een verbeterde nagalase-meting die onderscheid maakt tussen de vrije nagalase-activiteit, de gebonden hoeveelheid niet-actieve nagalase en de totale hoeveelheid nagalase (vrij plus gebonden).
De waarden van de nieuwe methode voor het meten van Nagalase verschillen van de waarden die eerder werden gerapporteerd en de normale grenzen (P10 – P90) zijn anders dan de eerder gerapporteerde waarden (nieuwe evaluatie op basis van sera van normale gezonde mensen) die moeten worden vergeleken met de verdeling van waarden waargenomen bij verschillende soorten patiënten (borstkanker, eierstokkanker, darmkanker, alvleesklierkanker …) Het gebruik van deze 3 parameters en hun stijging in het bloed kan worden gebruikt als een diagnostische en prognostische waarde voor een bepaald type kanker in elke patiënt. Hun waarde kan worden bepaald. De kosten van deze set analyses worden in rekening gebracht ter hoogte van het equivalent van de oude set parameters. Voor het bepalen van de Nagalase-GcMAF-complexniveaus wordt een afzonderlijke prijsstelling opgesteld.
In de oude NAGALASE-test staat het schijnbare Nagalase-niveau voor de enzymatische activiteit van nagalase, bepaald op verdund serum met een van umbelliferyl afgeleid specifiek substraat, maar de analytische methode is een kinetische meting. In de nieuwe methode genaamd vrije Nagalase gebruiken we ook hetzelfde van umbelliferyl afgeleid substraat voor Nagalase, maar de bepalingsmethode is een eindpuntmeting die de test robuuster maakt en minder gevoelig voor interferenties. In de oude methode was de kalibratie gebaseerd op een serumpool van meer dan 300 donoren, terwijl in de nieuwe methode de kalibratie gebaseerd was op het signaal van een exacte op gewicht gebaseerde hoeveelheid van het eindproduct van het omgezet substraat, dwz umbeliferon. Deze benadering van kalibratie en de eindpuntmeetmethode maken de bepaling stabieler en robuuster.
In de nieuwe methode is de range wederom bepaald op een populatie van ruim 300 normale gezonde controles, en zoals verwacht ligt deze range lager dan bij de oudere methode. Dit komt overeen met de mediaanwaarden verkregen bij normale gezonde donoren voor beide methoden, namelijk 0,73 voor de oude methode en 0,43 voor de nieuwe methode.
Voor het item effectieve nagalase (oud) en totale nagalase (nieuw) zijn deze twee items bedoeld om een idee te geven van de totale hoeveelheid Nagalase in omloop, dwz. de vrije nagalase (rechtstreeks gemeten aan de hand van zijn enzymatische activiteit) plus de circulerende gebonden nagalase (enzymatisch inactief of geblokkeerd).
Voor deze parameters zullen we grotere verschillen waarnemen tussen de oude en de nieuwe methode. In de oude methode werd de effectieve nagalase afgeleid uit een berekening op basis van de niveaus van vrij Nagalase en het Gc-globuline, in de nieuwe methode wordt de totale Nagalase (vrij + gebonden) uit het serum neergeslagen, omgezet in enzymatisch actief enzym en gemeten als het totale Nagalase-gehalte van serum. Normale bereiken en mediaanwaarden in beide methoden werden bepaald op een normale gezonde controlepopulatie van 300 normale gezonde controles.
Om vergelijkingsredenen kunt u het principe toepassen van de verhoudingen van het oude resultaat versus de mediaanwaarde van de normale populatie, dat wil zeggen oude waarde boven 1,03 (mediaan oude methode), versus de verhouding van de waarde nieuwe methode boven 1,44 (mediaan nieuwe methode) en vervolgens de verhouding van de twee verkregen waarden.
Naast de bovengenoemde reeks parameters is er een totaal nieuwe parameter ontwikkeld om een idee te krijgen van de respons van de aangeboren immuunrespons. De aangeboren immuunrespons van de patiënt wordt gemoduleerd door macrofaag-, monocyt- en dendritische celactiviteit. Deze activiteit wordt gestimuleerd door een macrofaag-activerende factor, namelijk Gc-MAF, die in een zeer lage concentratie in het bloed voorkomt.
Bovendien wordt dit Gc-MAF onmiddellijk verwijderd na zijn binding aan Nagalase en de binding aan de geactiveerde macrofagen, monocyten en dendritische cellen. Tot nu toe heeft niemand vrij Gc-MAF in serum of plasma kunnen meten.
Naast de cellulaire opname van Gc-MAF wordt deze activerende factor echter ook uit het bloed verwijderd als een stabiel complex met het Nagalase-enzym en de hoeveelheid van dit Nagalase-GcMAF-complex is een aanvullende parameter om de aangeboren immuunafweer te monitoren. Als er een invasie door kankercellen plaatsvindt, is er blijkbaar sprake van een defect aangeboren immuunsysteem als gevolg van een lage productie van Gc-MAF uit zijn voorloper Gc-globuline. Een afname van het circulerend Gc-MAF-complex is een marker voor een defect aangeboren immuunsysteem en kan worden gebruikt voor de diagnose van kanker en voor het monitoren van kankertherapie met Gc-MAF-achtige suppletie. Deze set aanvullende parameterset wordt afzonderlijk gefactureerd wanneer deze test door de arts wordt aangevraagd.
De methode voor de bepaling van Gc-globuline is gewijzigd van turbidimetrie naar een ELISA-methode. De kalibratie van beide tests is echter hetzelfde gebleven en de standaard in beide methoden is gebaseerd op een serumpool met meer dan 300 sera van normale gezonde controlepersonen. De normale bereiken voor de oude testversie en de nieuwe testversie zijn gebaseerd op de percentielwaarden P10 (ondergrens) en P90 (bovengrens) van sera van meer dan 300 normale gezonde controles.
De mediaanwaarde van deze normale populatie verschoof lichtjes van 420,71 mg/L (oude methode) naar 451,03 voor de nieuwe methode (ELISA). Gc-globuline wordt voornamelijk in de lever gesynthetiseerd en er kan fysiologische variatie verwacht worden in functie van de tijd en in functie van de leverfunctie. Alleen als Gc-globuline de neiging heeft voortdurend te dalen, kan dit een aanwijzing zijn voor een afnemende leverfunctie die uiteindelijk tot leverfalen kan leiden. Alleen bij concentraties onder de 100 mg/l bestaat er echter een acuut gevaar voor leverfalen. Bij niveaus boven 300 mg/l is er zeker geen reden om toe te geven dat het niveau van deze precursor de normale synthese van Gc-MAF en het aangeboren immuunsysteem zou beïnvloeden.
De DPP4-waarde wordt nog steeds verstrekt en de methode blijft hetzelfde. DPP4 is een T-celactiveringsmarker die op veel immuuncellen aanwezig is, maar deze neemt toe bij immuunactivatie. Een deel van het membraangebonden DPP4 kan worden uitgestoten in het plasma/serum waar het wordt gemeten. Een verhoogde waarde van Dpp4 zou in verband moeten worden gebracht met immuunactivatie van verschillende oorsprong (infectie, ontsteking, auto-immuniteit enz.). Lage niveaus van DPP4 zijn in verband gebracht met het chronisch vermoeidheidssyndroom en bepaalde tumoren kunnen zeer grote hoeveelheden DPP4 in het serum afgeven.
De nieuwe aanvraagformulieren geven dus 2 Nagalase-panelen aan:
NAGAnew1 (“dezelfde” prijs, 108€ voor Europa, 125$ voor de VS), met 4 parameters:
totaal Nagalase
vrije Nagalase
gebonden Nagalase en
DPP4.
NAGAnew2 (205€ voor Europa, 240$ voor de VS), met 6 parameters:
totaal Nagalase
vrije Nagalase
gebonden Nagalase en
Nagalase-GcMAF-complex
Gc-eiwit en
DPP4.
Monsterverzameling
Testen op serum: Volbloed moet worden verzameld in serumbuisjes (zoals BD Vacutainer SST II Advanced-buisje, gele dop). De buisjes moeten door een verpleegkundige/arts bij 3000 rpm gedurende 10 minuten worden gecentrifugeerd na één uur stollen bij kamertemperatuur. Het serum moet in nieuwe, steriele buizen worden verdeeld en ingevroren. Vries onmiddellijk minimaal 3 ml serum in en stuur het op droogijs naar het laboratorium. Het monster moet te allen tijde bevroren worden bewaard. Gecentrifugeerde serumbuisjes kunnen op kamertemperatuur worden verzonden als de levering ervan binnen 24 uur na de bloedafname plaatsvindt.
