NL
EN
FR
ES
PTPT
RED Laboratories biedt
Phelix Phage Test aan: een baanbrekende manier om intracellulaire bacteriën te detecteren en een antwoord op niet-gediagnosticeerde zieke mensen
Wat zijn bacteriofagen?
Fagen behoren tot de eenvoudigste en meest primitieve levensvorm (virussen). Ze zijn buitengewoon specifiek voor de bacteriële gastheer die ze infecteren om zich te verspreiden. Ze kunnen hun gastheer snel infecteren en het genetische materiaal ervan in hun gastheer inbrengen. Als gevolg hiervan produceren ze grote aantallen kopieën die de bacteriën die de infectie veroorzaken verder kunnen infecteren (en in sommige specifieke gevallen kunnen decimeren). Ze kunnen de bacteriën ook kwetsbaar maken voor klassieke behandelingen door hun genetisch materiaal te veranderen.
Het belangrijkste is dat bacteriofagen een dodend vermogen kunnen hebben. Fagen zijn zo klein dat ze bacteriële biofilms kunnen binnendringen en uiteindelijk kunnen verstoren. Dergelijke biofilms vormen een belangrijke barrière die door bacteriën wordt gebruikt tegen antibiotica en leveren daarom een belangrijke bijdrage aan antibioticaresistentie. Het vermogen van fagen om biofilms te penetreren, stelt hen in staat zich naar hoge niveaus in de gelokaliseerde bacteriële infectiecentra te verspreiden en de bacteriën daarin te vernietigen, om een sterk, maar zeer gelokaliseerd, therapeutisch effect te produceren.
Bacteriofagen zijn alomtegenwoordig en maken deel uit van het natuurlijke 'ecosysteem' van de levens- en replicatiecycli van bacteriën. We hebben besloten ons te concentreren op bacteriofagen als doelwit voor directe detectie van een infectie, omdat deze specifiek zijn en groter zijn dan de pathogene bacteriële populatie.
Uitvinders:
Doctor Jinyu Shan (Universiteit van Leicester)
Professor Martha Clokie (Universiteit van Leicester)
Doctor Louis Teulières (Phelix)
Er is ook een Phelix Phage Test beschikbaar om een breed scala aan Rickettsia's te detecteren: Rickettsia japonica (meerdere stammen); Rickettsia heilongjiangensis (meerdere stammen); Rickettsia parkeri (meerdere stammen); Rickettsia raoultii (meerdere stammen); Rickettsia rickettsia (meerdere stammen); Rickettsia slovaca (meerdere stammen); Rickettsia montanensis; Rickettsia-peacocki; Rickettsia Afrika; Rickettsia conorii.
Phelix Faag Borrelia Test - Wetenschappelijke publicaties
Targeting Multicopy Prophage Genes for the Increased Detection of Borrelia burgdorferi Sensu Lato (s.l.), the Causative Agents of Lyme Disease, in Blood.
Shan J, Jia Y, Teulières L, Patel F, Clokie MRJ.
Front Microbiol. 2021 Mar 15;12:651217. doi: 10.3389/fmicb.2021.651217. PMID: 33790883; PMCID: PMC8005754.
Combining citizen science and molecular diagnostic methods to investigate the prevalence of Borrelia burgdorferi s.l. and Borrelia miyamotoi in tick pools across Great Britain.
Shan J, Jia Y, Hickenbotham P, Teulières L, Clokie MRJ.
Front Microbiol. 2023 Apr 26;14:1126498. doi: 10.3389/fmicb.2023.1126498. PMID: 37180256; PMCID: PMC10169747.
Overcoming the Challenges of Lyme Disease Diagnosis: The Role of Phage-based Testing.Jia Y, Mijatovic T, Teulières L, Clokie M, Shan J. Medical Research Archives, [S.l.], v. 11, n. 11, nov. 2023. ISSN 2375-1924. Available at: <https://esmed.org/MRA/mra/article/view/4650>. Date accessed: 16 jan. 2024. doi: https://doi.org/10.18103/mra.v11i11.4650.
Dr. Teulieres Levenscyclus van fagen animatie 2020
Om meer te weten te komen over bacteriofagen in het algemeen, bekijk deze video: L'incroyable histoire des tueurs de bactéries ARTE 22
Dr. Louis Teulières Phelix Faag Borrelia Test update
Dr Louis Teulières Phelix Phage Borrelia Test en FR mise à jour
Dr Louis Teulières presents bacteriophages (Phage) Borrelia test
Dr Louis Teulières présent les bactériophages borrelia test
Waarom bacteriofagen als diagnostisch hulpmiddel gebruiken?
Door teken overgedragen infecties nemen wereldwijd toe – de ziekte van Lyme is een van de meest voorkomende door vectoren overgedragen infecties in de VS en Europa en bereikt epidemische niveaus (Kugeler et al. 2015; Sykes et al. 2014). Hoewel de meeste teken het vermogen hebben om een aantal ziekteverwekkers over te brengen die ziekten bij de mens veroorzaken, is de ziekte van Lyme de meest bekende door teken overgedragen ziekte en wordt veroorzaakt door bacteriën van het geslacht Borrelia; typisch Borrelia burgdorferi, dit zijn gramnegatieve spirocheetbacteriën.
Borrelia are divided into “genospecies”; among the most common include B. burgdorferi sensu stricto, B. garinii, B. afzelii, B. spielmanii, B. bavariensis en de pas geïdentificeerde B. miyamotoi. The overall high failure rate of tick-borne infection (TBI)-related testing underscores the necessity for novel approaches, i.e. not relying on serology and two-tier testing.
Op PCR gebaseerde tests worden steeds vaker in klinische omgevingen gebruikt en hebben verschillende duidelijke voordelen ten opzichte van serologie. Ze detecteren de aanwezigheid van infectieuze agentia direct. In tegenstelling tot serologie zijn ze niet afhankelijk van de ontwikkeling van antilichamen, wat enkele weken kan duren, en niet alle patiënten zijn in staat deze te ontwikkelen. Toch kent PCR-testen ook beperkingen: DNA-testen maken geen onderscheid tussen levende en dode organismen.
Het concept is dat we niet langer naar de bacterie zoeken, maar naar de verplichte bacteriofaag, die probeert de bacterie te vinden om te overleven. Het genetische materiaal van de bacteriofaag is specifiek voor de bacterie waarmee deze geassocieerd is. Dit betekent dat de verschillende soorten bacteriën verschillende bacteriofagen zullen hebben.
Bacteriofagen zijn alleen aanwezig bij actieve bacteriële infecties; daarom is een op fagen gebaseerde test een direct bewijs van een actieve infectie. Het huidige knelpunt bij het detecteren van Borrelia met PCR’s is hun lage gevoeligheid. We hebben een directe en specifieke methode ontwikkeld die gevoeliger is. Onze detectiemethode (gepatenteerd door Phelix R&D en Leicester University, WO2018083491A1) bestaat uit het richten op de aanwezigheid van in de minderheid zijnde profeten die deel uitmaken van de lysogene cyclus van bacteriën.
Preciezer gezegd: één manier om de gevoeligheid van een PCR-test te vergroten is door het aantal PCR-doelen te vergroten. In tegenstelling tot de huidige PCR-methoden bij de diagnose van Lyme, waarbij bacteriële genomische DNA-gebieden worden versterkt die slechts één kopie in elke bacterie hebben (zoals het bacteriële 16S rRNA-gen, het RecA-gen en het 5S-23S intergene gebied), stellen wij een gevoeliger, faag- gebaseerde PCR-test voor het detecteren van de ziekte van Lyme en relapsing Fever veroorzaakt door Borrelia burgdorferi sensu lato. Om dit te doen, richten we ons op een faag-DNA-sequentie die specifiek is voor alle Borrelia-soorten: de ziekte van Lyme en relapsing Fever.
Onze huidige op fagen gebaseerde projecten richten zich nu op een reeks andere bacteriën waarvan bekend is dat ze betrokken zijn bij chronische bacteriële infecties, zoals Rickettsia, Bartonella, Sutterella en Mycoplasma. Bacteriofagen zouden een diagnostisch hulpmiddel kunnen worden, gebaseerd op het principe dat als er fagen zijn, dit komt omdat er levende bacteriën zijn. Fagen zijn in de bloedbaan wanhopig op zoek naar bacteriën, want als ze ze niet vinden, zullen ze sterven. En ze zijn veel talrijker dan bacteriën (er zijn 10 tot 100 bacteriofagen per bacterie).
Deze aanpak biedt een verhoogde gevoeligheid vanwege het feit dat er veel meer circulerende fagen zijn dan bacteriën. Daarom is deze nauwkeuriger en gevoeliger dan conventionele PCR-tests die vaak negatief zijn vanwege de lage bacterieconcentratie in het bloed. Het is ook een DIRECTE test, die bacterieel eigen genetisch materiaal in het lichaam aantoont, in tegenstelling tot alle bestaande indirecte tests (ELISA, Western BLOT, LTT/ELISPOT-test). Ten tweede maakt het het mogelijk om onderscheid te maken tussen de verschillende subtypes van bacteriën (B. burgdorferi sl, B. miyamotoi, …), evenals de recidiverende koortsen. Ten slotte is deze test ook de allerbeste keuze voor de vroege detectie (bedenk dat antilichamen enkele weken nodig hebben om aan te tonen….).
Wat is de Phelix-faagtest?
De Phelix Phage-test (patent nr. WO2018083491A1) wordt uitgevoerd op volbloed, maar kan ook worden gebruikt voor elk ander materiaal waarvan wordt vermoed dat het een bepaalde ziekteverwekker bevat (zoals biopsie, punctievloeistof uit een gezwollen gewricht, hersenvocht of teken). De allereerste stap is het extraheren van DNA met behulp van een specifieke handmatige methode om de allerbeste terugwinning van pathogeen-DNA te garanderen. Het geëxtraheerde DNA ondergaat qPCR met behulp van gepatenteerde primers en probes voor een specifieke faagdetectie. Geamplificeerde fragmenten worden verder geanalyseerd door middel van sequencing om de positiviteit van het monster te bevestigen (dwz om vals-positieve monsters uit te sluiten).
Deze techniek wordt nu voor de allereerste keer toegepast voor de detectie van Borrelia (B. burgdorferi s.l. en optioneel B. miyamotoi, B. hermsii, B. duttonii, etc). This technique is now tested for other tick- borne diseases (Bartonella, Rickettsia, etc). In order to further improve the assay, we are now testing the same procedure on urine samples. In line with this, all patients are receiving, in the testing kit, 2 EDTA tubes for the whole blood along with one container for the first morning urine. We aim to compare the test sensitivity between blood and urine and if this trial is conclusive it will enable a testing on urine and will thus bypass invasive blood draw, enabling easier testing for all patients and especially children. The test price comprises and supports this ongoing research and development.
Betekenis
Het is belangrijk om het testresultaat te analyseren binnen de klinische context van de geteste persoon. Het resultaat van de PCR-faagtest wordt als positief of negatief gerapporteerd. In sommige situaties kan het ook als “borderline” worden gerapporteerd; dit betekent dat er slechts kleine DNA-fragmenten werden gevonden (als gevolg van verhoogde apoptose, het oplossen van infecties, enz.). Een positief resultaat betekent dat de patiënt op het moment van de test Borrelia in zijn lichaam had. Een positief resultaat bij afwezigheid van symptomen suggereert dat, ondanks de aanwezigheid van bacteriën, het immuunsysteem de situatie lijkt te beheersen. Bij een positieve test na een recente of eerdere serologische diagnose is het van belang om de mogelijkheid van een laat stadium/post-lyme syndroom of chronische vorm van borreliose te bespreken.
Een negatief resultaat betekent dat op het moment van de test en in een bepaald monster de aanwezigheid van Borrelia niet is aangetoond. Het is belangrijk om te onthouden dat bij late stadia het aantal bacteriën zeer laag is en grotendeels verborgen in weefsels; dienovereenkomstig zal het aantal circulerende fagen ook laag zijn. Het is raadzaam om opnieuw te testen wanneer verslechtering van symptomen wordt waargenomen. Onthoud dat teken veel andere pathogenen dragen en overdragen (Bartonella, Rickettsia, Anaplasma, etc.) die allemaal zeer vergelijkbare symptomen geven.
Een negatieve Borrelia test met aanhoudende symptomen kan dus wijzen op de aanwezigheid van andere pathogenen. Ten slotte is het ook belangrijk om te onthouden dat bij late stadia de symptomen een diepgaande immuun- en gastro-intestinale dysregulatie weerspiegelen als gevolg van eerder onbehandelde door vectoren overgedragen ziekte(n). Chronische ontsteking en infecties met lage intensiteit zijn de resulterende complicaties van onbehandelde door vectoren overgedragen ziekten en moeten dus worden aangepakt naast het testen op de aanwezigheid van een specifieke ziekteverwekker.
Phelix Phage Borrelia
